Umlčení genu pomocí virem zprostředkované RNAi

RNA interference (RNAi) je cestou, jak umlčet geny a tak prokázat jejich funkci i u ne-modelových organismů, kde chybí možnost cílené mutagenese. Problémem je vnesení interferující dvouvláknové RNA, která by spustila degradaci cílové mRNA, do buněk organismu. Tento problém jsme vyřešili použitím rekombinantního viru Sindbis. Sindbis je RNA virus, který v hostitelské buňce replikuje svůj genom včetně námi vloženého genu v obou směrech, takže vznikající dvouvláknová RNA může spouštět degradaci endogenní mRNA pro tento gen a tak ho umlčet. Tento proces se nám poprvé podařilo prokázat in vivo u bource morušového. Umlčením genu pro transkripční faktor Broad-Complex (BR-C) jsme narušili kuklení bource morušového (obrázek) a dva typy procesů během metamorfosy: (i) diferenciaci křídel, očí a nohou dospělců z larválních primordií, a (ii) programovanou smrt larválních snovacích žlaz. Tyto defekty odpovídají účinkům mutací v genu BR-C u drosofily a tudíž ukazují, že úloha genu BR-C při metamorfose hmyzu je evolučně konservovaná. Vedle toho naše výsledky prokázaly, že virus Sindbis je užitečným nástrojem pro genetické „knock-outy“ u ne-modelových druhů. (Uhlirova et al. 2003; P.N.A.S. 100, 15607-15612).